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电泳和Western转印的常见问题
2010-07-09 18:05   发布范围:公开
表1 Common problems for electrophoresis and western bloting
问 题 可能原因 建议解决方法
推荐电压条件下电泳时间过长。 电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。
推荐电压条件下电流过高,热量过大。 电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。
推荐电压条件下电流过低或无电流。 接触不良。 在电泳前移除胶盒底部的封条;确认缓冲液没过加样孔;检查buffer core上导线连接。
蛋白带型条状(streak) 上样过量。
样品中盐浓度过高。
降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度。
样品沉淀。 加大样品中SDS的浓度。
样品中的污染,如脂类或DNA 复合物。 离心或过滤样品以除去特定污染。
制胶不佳。 确保灌胶均匀,一次完成。
条带模糊。 蛋白样品部分变性。 完全变性蛋白。
蛋白样品部分还原。 确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。
电泳时间过长。 观察前面的指示剂染料,掌握恰当的电泳时间。
哑铃形条带或"微笑"条带。 上样体积过大导致不完全堆积。 使用恰当的上样体积。如果样品过稀,使用超滤浓缩。
电泳过程中电场不均匀。 如果蛋白浓度已知,上样时确保对称。
分离胶表面不平。 在制胶时使分离胶表面水平。
凝胶过期。 在指定的失效期前使用凝胶。
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